fa کلون سازی cDNA سیستاتین ذرت (CCs)، و ارزیابی اثر بازدارندگی پروتئین آن در شرایط آزمایشگاهی عمومى General پژوهشي Research جداسازی و کلون سازی ژن‌های نوترکیب بازدارنده پروتاز (PIs)گیاهی و انتقال آنها به ژنوم گیاهان دیگر، راه را برای مقاومت گیاهان تراریخته در مقابل بعضی آفات مهاجم هموار ساخته است. در پژوهش حاضر با علم به قدرت مهارکنندگی سیستاتین‌ها به‌عنوان عامل مهارکننده پروتاز سیستئین، ژن‌های سیستاتین از ژنوم ذرت جداسازی گردید. cDNA مربوط به این ژن‌ها با استفاده از پرایمرهای اختصاصی در محیط آزمایشگاه ساخته شد و پس از خالص سازی محصول RT - PCR در ناقل‌های پلاسمید <span style="font-style: italic">pUC19 </span>و <span style="font-style: italic">pGEX </span>2T کلون گردید. ناقل‌های پلاسمید نوترکیب (حاوی سیستاتین‌های ذرت) با استفاده از دستگاه شوک الکتریکی به سلول‌های مستعد اشرشیاکولی Dh5α انتقال داده شدند. سلول‌های مستعد حاوی کلون‌های نوترکیب در محیط کشت مساعد رشد داده شدند و پروتئین‌های سیستاتین متصل به گلوتاتیون-اس-ترانسفراز (GST) با استفاده از فیلتر گلوتاتیون آگاروز بید (Glutation Agarose Bead) خالص سازی گردیدند. در هر مرحله از پیشرفت کار وجود ژن‌های سیستاتین به‌وسیله الکتروفورز نمونه‌ها مورد تأیید قرار گرفت. در آزمایش‌های بعدی اثر بازدارندگی پروتئاز و پایداری نسبی سیستاتین‌های نوترکیب مورد ارزیابی قرار گرفت. Isolating and cloning of plant protease inhibitor (PIs) genes and transforming them to the genome of other plants have paved the way for producing resistant transgenic plants against pests. Knowing that cystatins act as inhibitor factor against cysteine protease, short and long cystatin genes were isolated from maize mRNA. By using specific primers, cDNA of these genes were constructed and cloned in <span style="font-style: italic">pUC19 </span>and <span style="font-style: italic">pGEX </span>2T plasmid vectors. The recombinant plasmid vectors were then transformed to <span style="font-style: italic">E. coli</span> (strain DH5 α) competent cells using electroporation. The competent cells harboring the clones were grown in suitable medium and cystatin proteins fused to Glutation-S-transferase (GST) were purified by glutation agarose bead filter. In each step of the procedure the presence of cystatin genes were confirmed through electrophoresis. Further evaluation proved the inhibitory effect and a mild stability of at least one of the corn cystatin (CC II) when incubated with cysteine protease. سیستاتین ذرت، بازدارنده پروتئازی، ناقل پلاسمید، سلول مستعد E .coli ، تراریخته، شوک الکتریکی : Protease Inhibitor, Corn Cystatins (CCs), pUC19 plasmid vector, E .coli competent cell, cloning. 367 380 http://jcpp.iut.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2-669&slc_lang=fa&sid=1 Gh. Riazi قدرت‌اله ریاضی 10031947532846006126 10031947532846006126 Yes